سم دلتا کلستریدیوم پرفرنجنس CD9 را هدف قرار می دهد تا NEC و آسیب مغزی را تحریک کند

انتروکولیت نکروزان (NEC) مخرب ترین اورژانس گوارشی در نوزادان نارس است که اغلب باعث مرگ و میر و اختلالات رشد عصبی طولانی مدت می شود 1، 2. اگرچه میکروبیوتای روده در پاتوژنز NEC 3، 4، 5 نقش دارد، عوامل میکروبی باعث NEC و آسیب شناسی مغز زیر نامشخص هستند. در اینجا ما پاتوبیونت‌های کلستریدیوم پرفرنجنس حاوی سم دلتا را در میکروبیوم روده افراد مبتلا به NEC شدید و کشنده شناسایی می‌کنیم.

از نظر بالینی، نوزادان آلوده پیامدهای بدتری از جمله التهاب سیستمیک نابجا، آسیب شدید عصبی و انعقاد را نشان می دهند. ما یک مدل موش ایجاد می‌کنیم که در آن عفونت با سم دلتا مثبت C. perfringens، یا قرار گرفتن در معرض سم دلتا به تنهایی، ویژگی‌های بالینی NEC، از جمله نکروز روده و آسیب حاد مغزی را خلاصه می‌کند. از نظر مکانیکی، سم دلتا ترجیحا ماکروفاژها را هدف قرار می‌دهد، سیگنال‌های التهابی و پیروپتوز را فعال می‌کند، و باعث ایجاد یک آبشار التهابی سریع می‌شود که یکپارچگی سد خونی مغزی را به خطر می‌اندازد و باعث التهاب عصبی می‌شود.

از طریق یک صفحه نمایش CRISPR در کل ژنوم، ما تتراسپانین CD9 را به عنوان گیرنده میزبان برای سم دلتا شناسایی می کنیم. با استفاده از موش‌های حذفی Cd9- اختصاصی سیستمیک، میلوئیدی و خاص اپیتلیال روده‌ای، نشان می‌دهیم که فرسایش سیستمیک و میلوئیدی Cd9 از موش‌ها در برابر کشندگی ناشی از سموم، اختلال عملکرد سد خونی-مغزی و آسیب چند عضوی محافظت می‌کند، در حالی که حذف Cd9 اپیتلیال، حذف محرک اصلی ماکرو را نشان می‌دهد. پاتوژنز وابسته به CD9 perfringens.

علاوه بر این، یک آنتی بادی مونوکلونال ضد سم دلتا خنثی کننده، در برابر پیشرفت بیماری محافظت می کند. این یافته‌ها نشان می‌دهد که زیرمجموعه‌ای از NEC یک اختلال با واسطه سم خاص است و محور دلتا توکسین-CD9 را به عنوان یک هدف درمانی برای این زیر مجموعه تأیید می‌کند.

NEC یکی از علل اصلی مرگ و میر و عوارض طولانی مدت در نوزادان نارس باقی می ماند 1، 2. پاتوژنز NEC چند عاملی است و شامل تعامل پیچیده رشد روده نابالغ، اختلال عملکرد سد روده، دیس بیوز روده و پاسخ التهابی بیش از حد است 3، 4، 5، 6. محرک‌های خاص NEC و مکانیسم‌هایی که باعث پیشرفت سریع آن می‌شوند هنوز به خوبی شناخته نشده‌اند.

تاثیر NEC فراتر از روده است. بیش از نیمی از بازماندگان پس از عمل دچار آسیب مغزی و اختلال در رشد عصبی می شوند 7 و 8 که مسیرهای التهابی TLR4 در این آسیب شناسی دخیل است 9 و 10 . بسیاری از بینش‌ها از مدل‌های تجربی مشتق شده‌اند که از هیپوکسی، استرس سرما و تغذیه با فرمول هیپراسمولار برای افزایش آسیب‌پذیری روده استفاده می‌کنند. اگرچه این مدل‌ها برای نقشه‌برداری مسیرهای التهابی ارزشمند بوده‌اند، اما ممکن است برای بررسی رویدادهای آغازین اولیه میکروبیوم‌محور چندان مناسب نباشند.

میکروبیوتای روده در حساسیت NEC نقش دارند: NEC با دیس بیوز 3، 4، 5 مرتبط است، موش های بدون میکروب در برابر آسیب NEC مانند مقاوم هستند 13 و مداخلات اصلاح کننده میکروبیوتا محافظتی هستند 14، 15. چندین مطالعه غنی سازی C. perfringens تولید کننده سم را در NEC 16، 17، 18 شناسایی کردند، اما عوامل حدت علی تعریف نشده باقی می مانند.

C. perfringens یک بی هوازی گرم مثبت در همه جا حاضر است که سموم مختلفی تولید می کند 19، 20. سویه ها بر اساس مجموعه سموم به هفت نوع سم (A-G) طبقه بندی می شوند. سویه‌های نوع C سموم بتا و دلتا تولید می‌کنند که هر دو سموم منافذی (PFT) هستند که با تشکیل منافذ گذرنده 21، 22، 23 باعث مرگ سلولی می‌شوند. در حالی که توکسین بتا به خوبی مشخص شده است، سم دلتا هنوز مورد مطالعه قرار نگرفته است. در اینجا ما سم دلتا C. perfringens را به‌عنوان یک عامل بیماری‌زایی که باعث نکروز روده و آسیب مغزی در زیرمجموعه‌ای از NEC می‌شود، شناسایی می‌کنیم و راهی برای مداخله درمانی هدفمند فراهم می‌کند.

برای بررسی نقش میکروبیوتای روده در NEC، نمونه‌های مدفوع 28 نوزاد نارس بدون NEC و 16 نوزاد نارس با NEC را بررسی کردیم. تجزیه و تحلیل توالی یابی 16S rRNA غنی سازی C. perfringens را در نمونه های NEC نشان داد (شکل 1a)، مطابق با گزارش های قبلی 16، 17. دو مورد کشنده NEC فراوانی C. perfringens را نشان دادند (داده های توسعه یافته شکل 1a). برای تایید این یافته، ما کشت بی هوازی نمونه های مدفوع را از 49 فرد بدون NEC و 17 بیمار مبتلا به NEC انجام دادیم (جدول تکمیلی 1). سی.

کشت‌های مثبت perfringens تولید گاز قابل مشاهده را نشان دادند و با جداسازی انتخابی تریپتوز سولفیت سیکلوسرین (TSC) آگار و هدف‌گیری PCR ژن‌های اختصاصی C. perfringens تأیید شدند (داده‌های توسعه یافته شکل 1b-d). به طور کلی، C. perfringens در بیماران مبتلا به NEC در مقایسه با نوزادان بدون NEC (56٪ در مقابل 18٪) شایع تر بود که از ارتباط آن با NEC حمایت می کند (شکل 1b,c).

توالی‌یابی ژن 16S rRNA نمونه‌های مدفوع از نوزادان با (n = 16) و بدون (n = 28) NEC. b، c، خلاصه (نمودار دایره ای (b) و جدول (c)) تشخیص C. perfringens (Cp) و سم دلتا در سراسر گروه های غیر NEC (n = 49) و NEC (n = 27) که توسط کشت بی هوازی و سرولوژی تعیین می شود. d، تشخیص ELISA آنتی بادی ضد سم دلتا در سرم (رقت 1:2700) نوزادان بدون (n = 5) و با (n = 12) NEC.

e، تغییرات برابر پارامتر بالینی بین سم دلتا + (n = 2) و سم دلتا - (n = 5) گروه NEC. گرادیان آبی به سرخابی نشان دهنده تغییر قدر است. تک درصد، درصد مونوسیت؛ T-CO 2، دی اکسید کربن کل. Neu%, درصد نوتروفیل; لنف، درصد لنفوسیت. f، g، MRI مغز نماینده T2W و T2 FLAIR از گروه‌های غیرNEC (n = 3)، سم دلتا - NEC (n = 4) و Delta toxin + NEC (n = 2) (f) اسکن می‌کند، و کمی کردن شاخص ایوانز (> 0.3 نشان دهنده بزرگ شدن بطن) است.

h، شماتیک مدل NEC موش نوزادی القا شده با گاواژ داخل معده دو بار در روز با فرمول حاوی C. perfringens. تصویر نشان دهنده نکروز روده در یک توله موش P11 است. i، j، رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) روده (i) و نمرات هیستوپاتولوژی (j) نوزادان 4 روز پس از عفونت با یا بدون C. perfringens. n = 5 (NC)، n = 6 (سم دلتا - C. perfringens) و n = 6 (سم دلتا + C. perfringens). نوار مقیاس، 100 میکرومتر. k، منحنی بقای نوزادان آلوده به سم دلتا - یا سم دلتا + C. perfringens. n = 8.

l، m، رنگ آمیزی H&E مغز (l) و تعیین کمیت عرض بطن جانبی (چپ؛ n = 4) و نمرات آسیب اپاندیمی (راست؛ n = n) (m) نوزادان آلوده به سم دلتا - یا سم دلتا + C. perfringens. میله های مقیاس، 100 میکرومتر (بالا) و 50 میکرومتر (پایین). تصاویر نماینده یکی از سه آزمایش مستقل نشان داده شده است. داده ها میانگین ± s.d هستند. مقادیر P با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA؛ j و m)، آزمون t-test بدون جفت دو طرفه Student (g) و آزمون log-rank (k) تعیین شد. * P <0.05، ** P <0.01، *** P <0.001، **** P <0.0001.

نمودار در h با استفاده از BioRender ایجاد شد. ژانگ، اس. https://BioRender.com/o2lct20 (2026).

C. perfringens مجموعه ای از سموم از جمله آلفا، بتا، اپسیلون، سم یوتا، انتروتوکسین (CPE)، سم شبه بتا انتریت نکروزه (NetB) و پرفرنگولیزین O (Pfo) را تولید می کند. سپس بررسی کردیم که آیا پروفایل های سم خاص با پیامدهای شدید مرتبط است یا خیر. تایپ توکسین مبتنی بر PCR ایزوله‌های دو بیمار فوت شده را به عنوان سویه‌های C. perfringens نوع C حاوی ژن دلتا توکسین (Delta Toxin + C. perfringens Clinical-03 و Clinical-15) شناسایی کرد (داده‌های توسعه یافته شکل 1e). تولید سم دلتا توسط تجزیه و تحلیل وسترن بلات رویی کشت تایید شد (توسعه داده ها شکل 2).

1f,g). ما بیشتر آنتی‌بادی‌های ضد سم دلتا را در دو بیمار با NEC جراحی شدید شناسایی کردیم که کشت مدفوع آنها منفی بود، احتمالا به دلیل درمان آنتی‌بیوتیکی، که نشان‌دهنده عفونت قبلی با سویه‌های Delta Toxin + C. perfringens است. تجزیه و تحلیل سرولوژیکی گسترده ده بیمار دیگر با NEC جراحی شدید، پنج مورد آنتی بادی مثبت ضد سم دلتا را شناسایی کرد (جدول تکمیلی 2).

بنابراین، 7 نفر از 12 (58٪) بیمار با NEC شدید شواهد سرولوژیکی قرار گرفتن در معرض سم دلتا را نشان دادند، در حالی که سم دلتا در هیچ نوزادی بدون NEC توسط PCR ایزوله مدفوع یا سرولوژی تشخیص داده نشد (شکل 1b-d).

از نظر بالینی، نوزادان دلتا توکسین + التهاب سیستمیک، انعقاد و آسیب مغزی برجسته‌تری را در مقایسه با موارد سم دلتا که با افزایش پروتئین واکنش‌گر C و D-دایمر، کاهش مونوسیت‌ها، پلاکت‌ها و هموگلوبین مشخص می‌شوند، نشان دادند (شکل 1e). نکته مهم، تصویربرداری رزونانس مغناطیسی مغز (MRI) در این بیماران آسیب شدیدتر، از جمله بزرگ شدن بطن جانبی را نشان داد (شکل 1f,g).

برای ارزیابی بیماری‌زایی سم دلتا، جدایه‌های بالینی نماینده، سم دلتا + سویه C. perfringens کلینیک-03 و سم دلتا - سویه C. perfringens کلینیکی-01 را برای تجزیه و تحلیل ژنومی و مطالعات عفونت حیوانی انتخاب کردیم (داده‌های توسعه یافته شکل 1e,f). تجزیه و تحلیل فیلوژنتیکی نشان داد که سویه بالینی-03 با NCTC3181 (یک سم دلتا شناخته شده + سویه نوع C 24)، در حالی که کلینیک-01 با CVCC1160 (یک سویه سم دلتا - نوع C)، با دو جدایه بالینی که حدود 96% هویت DNAh را به اشتراک می گذارند (Ex).

موش‌های نوزادی که به‌مدت 4 روز با این سویه‌ها و فرمول‌های خوراکی گاواژ شده بودند، تنها پس از عفونت دلتا توکسین +، آسیب‌شناسی شدید روده مانند NEC، از جمله اختلال در ساختار روده، آسیب پرز و کریپت، نفوذ التهابی و لخته‌های فیبرین مخاطی، همراه با افزایش مرگ‌ومیر ایجاد کردند (شکل 1h-k). در طول عفونت با سویه بالینی-03، سم دلتا عمدتا در روده، با سطوح پایین‌تر در کلیه و ریه تشخیص داده شد، اما در مغز بر اساس وسترن بلات و سنجش ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) غیرقابل تشخیص بود (توسعه داده‌ها شکل.

1i,j). با این وجود، موش‌های آلوده دچار ناهنجاری‌های مغزی شدید، از جمله بزرگ شدن بطن جانبی و آسیب سلول‌های اپاندیمی شدند (شکل 1l,m). مقایسه سویه مرجع با استفاده از NCTC3181 و CVCC1160 (تقریبا 99٪ هویت) تأیید کرد که سم دلتا + عفونت باعث آسیب شدید روده، مغز و ریه می شود (داده های توسعه یافته شکل 1k-m). در نهایت، سوپرناتانت های کشت از سویه های توکسین دلتا باعث ایجاد سمیت سلولی در سلول های HeLa، سلول های HT29 و ارگانوئیدهای روده شدند که توسط یک آنتی بادی پلی کلونال اختصاصی دلتا توکسین خنثی شد (داده های توسعه یافته شکل 1n-p).

این نتایج از سم دلتا به عنوان یک عامل بیماریزای ترشح شده کلیدی مسئول آسیب سلولی پشتیبانی می کند.

به دلیل چالش‌های فنی در انجام برخی سنجش‌ها در موش‌های نوزادی روز هفتم (P7)، ما موش‌های 4 هفته‌ای را برای آزمایش‌های بعدی وارد کردیم. تجویز داخل صفاقی (i.p.) سم دلتا خالص شده باعث مرگ و میر وابسته به دوز در هر دو گروه سنی شد و نوزادان حساسیت بیشتری نشان دادند (شکل 2a،b و داده های توسعه یافته شکل 2a). سپس توزیع سم دلتا را در موش‌های نوزاد 4 ساعت پس از داخل صفاقی اندازه‌گیری کردیم. تزریق 10 میکروگرم سم

مطابق با مدل عفونت، سطح سم در روده (حدود 61 میکروگرم در گرم) و پس از آن کلیه (تقریبا 15 میکروگرم در گرم) و ریه (حدود 7 میکروگرم در گرم)، با سم به سختی قابل تشخیص در مغز بود (تقریبا 61 میکروگرم در گرم) بالاترین میزان بود. این سطوح با سطوح توله‌های آلوده قابل مقایسه بود و از ارتباط فیزیولوژیکی مدل تزریق سم حمایت می‌کرد.

a، منحنی‌های بقای موش‌های P7 پس از چالش با سم دلتا. n = 10. b، تصاویری از موش‌های نوزاد پس از چالش با سم دلتا (راست)، و موش‌های کنترل همسان با سن (سمت چپ). د، روز c، d، رنگ آمیزی H&E روده (c) و امتیازات هیستوپاتولوژی (d) پس از چالش با دوز کم (4 میکروگرم، تجزیه و تحلیل در روز 5) یا دوز بالا (20 میکروگرم، 4 ساعت) با سم دلتا. n = 5. میله های مقیاس، 200 میکرومتر (c).

e-h، مغز (بطن سوم و اپاندیم (e, f) و قشر مغز و بطن جانبی (g, h)) نمرات هیستوپاتولوژی (e, h) و رنگ‌آمیزی H&E (f, g) از موش‌های نوزاد پس از چالش با سم دلتا. n = 5. برای f، میله های مقیاس، 100 میکرومتر (بطن سوم) و 20 میکرومتر (اپاندیم). فلش های سیاه نشان دهنده اختلال اپاندیمی هستند. فلش های آبی واکوئلاسیون اطراف بطن و ادم را نشان می دهد. و فلش های قرمز نشان دهنده خونریزی (f) است. برای g، میله های مقیاس، 50 میکرومتر (قشر مغز) و 100 میکرومتر (بطن جانبی).

فلش های سیاه نشان دهنده انقباض عصبی با حجم کاهش یافته، سیتوپلاسم هایپرکروماتیک و مرزهای هسته ای-سیتوپلاسمی نامشخص است. فلش های زرد انحطاط عصبی را نشان می دهد. و فلش های سبز نشان دهنده نفوذ سلول های التهابی (g) است. i، j، تصاویر MRI مغز با وزن T2 (i) و کمیت شاخص ایوانز (j) موش‌های 4 هفته‌ای پس از سم دلتا به صورت i.p. تزریق n = 3 (کنترل)، n = 3 (20 میکروگرم) و n = 4 (100 میکروگرم). فلش های زرد نشان دهنده شدت کانونی است.

k، l، تصویربرداری فوتوآکوستیک In vivo (PAI) جریان خون مغزی (k) و تعیین کمیت طول انشعاب میکروواسکولار (l) در قشر موش‌های 4 هفته‌ای. n = 4. m، شماتیک طرح آزمایشی برای سنجش آبی ایوانز برای ارزیابی اختلال BBB. D1، روز 1. n، o، تصاویری از کل مغز پس از پرفیوژن آبی ایوانز (n) و تعیین کمیت برون ریزی آبی ایوانز (o) در مغز موش‌های 4 هفته‌ای. n = 6. p، q، رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس (p) و میانگین شدت فلورسانس (MFI) کمیت (q) هیپوکامپ ZO-1.

فلش های سفید نشان دهنده کاهش سیگنال ZO-1 است. n = 4. برای p، میله های مقیاس، 100 میکرومتر. تصاویر نماینده یکی از سه آزمایش مستقل نشان داده شده است. داده ها میانگین ± s.d هستند. مقادیر P با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (d، e، h، j، l و o) و یک آزمون t-test دانشجویی بدون جفت دو طرفه (q) تعیین شد. نمودار در m با استفاده از BioRender ایجاد شد. ژانگ، اس. https://BioRender.com/o2lct20 (2026).

ما در مرحله بعدی نوزادان P7 و موش‌های 4 هفته‌ای را با استفاده از یک مدل حاد با دوز بالا برای تقلید از عفونت برق‌آلود، که در 4 ساعت آنالیز شد، یا یک چالش تک دوز پایین با پیگیری طولانی‌مدت تا فعالیت تقریبی سم باقی‌مانده پس از پاکسازی آنتی‌بیوتیک، آنالیز در روزهای 5 تا 7 را به چالش کشیدیم. در هر دو گروه سنی و استراتژی‌های دوز، سم دلتا یک آسیب شناسی چند عضوی شدید NEC را ایجاد کرد. روده ها اختلال مخاطی، تخریب پرزها، جدا شدن اپیتلیال و ادم را نشان دادند (شکل 2c,d و داده های گسترده شکل 2c,d).

همزمان، مغز خونریزی، بهم ریختگی اپاندیمی، ادم اطراف بطن، اتساع بطن (شکل 2e,f و داده های گسترده شکل 2e,f)، انقباض و دژنراسیون عصبی و نفوذ سلول های التهابی را نشان داد (شکل 2g,h-h و Ext. ما همچنین انعقاد داخل عروقی را در ریز عروق مغزی در ناحیه هیپوکامپ مشاهده کردیم (داده های توسعه یافته شکل 2j,k). در موش‌های 4 هفته‌ای، MRI مغز بیشتر تأیید کرد که سم دلتا باعث آسیب مغزی و اتساع بطن می‌شود (شکل 2i,j) که نشان‌دهنده آسیب‌شناسی عصبی مشاهده‌شده در بیماران مبتلا به NEC است.

تصویربرداری فوتوآکوستیک in vivo از مغز کاهش قابل توجهی در جریان خون مغزی، تراکم عروقی و شاخص انشعاب نشان داد که نشان دهنده آسیب هیپوکسیک-ایسکمیک مرتبط با دلتا توکسین و اختلال شناختی است (شکل 2k,l).

فراتر از مغز، سم دلتا باعث آسیب شناسی گسترده چند عضوی شد، به خصوص آسیب شدیدی که در کلیه و ریه مشاهده شد. این بافت ها علائم مشخصی از انعقاد، خونریزی و انفیلتراسیون سلولی التهابی را نشان دادند که به ویژه بر بصل النخاع، گلومرول و پارانشیم ریوی در هر دو گروه سنی تأثیر گذاشت (داده های توسعه یافته شکل 2l-o). علاوه بر این، موش‌های تیمار شده با سم رگ‌های گوش گشاد شده و برون‌روی آبی ایوانز را در مایع لاواژ صفاقی افزایش دادند که نشان‌دهنده آسیب عروقی 25 است (داده‌های توسعه یافته شکل 3a,b).

سم دلتا ناهنجاری‌های انعقادی سیستمیک، از جمله افزایش تعداد گلبول‌های قرمز خون، کاهش پلاکت‌ها و تغییر پارامترهای انعقادی، از جمله طولانی‌تر شدن زمان پروترومبین و زمان ترومبوپلاستین نسبی فعال، و کاهش فیبرینوژن را بیشتر کرد. این یافته ها انعقاد شدید منتشر شده داخل عروقی (DIC) مشاهده شده در بیماران سم مثبت دلتا با NEC را خلاصه می کند (شکل 1e). شناخته شده است که فعال شدن التهاب باعث انعقاد از طریق آزادسازی فاکتور بافتی 26 به واسطه ماکروفاژها می شود.

به طور مداوم، سم دلتا باعث آزادسازی فاکتور بافتی از ماکروفاژها و سلول های اپیتلیال روده Caco2 می شود (داده های توسعه یافته شکل 3i)، که نشان می دهد هر دو نوع سلول در انعقاد ناشی از سم نقش دارند.

برای تعریف سهم خاص سم دلتا در آسیب عصبی، ما اثرات سم بتا را که در انتریت نوع C C. perfringens دخیل است، ارزیابی کردیم. سم بتا سمیت سلولی انتخابی را برای HUVECs اندوتلیال نشان داد اما به طور قابل توجهی از سلول‌های اپیتلیال روده و ارگانوئیدهای HT-29 در امان ماند (داده‌های توسعه‌یافته شکل 4a-c)، که با گزارش قبلی که بتا توکسین ترجیحا سلول‌های اندوتلیال عروقی CD31 + 28 را هدف قرار می‌دهد، همسو می‌شود. در داخل بدن، باعث مرگ و میر سریع و وابسته به دوز شد (داده های توسعه یافته شکل.

4d)، اما در هیچ دوز آزمایش شده آسیب شناسی مغز را القا نکرد (داده های توسعه یافته شکل 4e). این داده‌ها نقش بیماری‌زایی خاص سم دلتا را به‌عنوان محرک آسیب‌شناسی چند عضوی شبه NEC نشان می‌دهند.

در ادامه بررسی کردیم که آیا آسیب مغزی ناشی از سم دلتا با اختلال عملکرد سد خونی مغزی (BBB) ​​و التهاب عصبی مرتبط است یا خیر. در موش‌های 4 هفته‌ای، اکسترازاسیون آبی ایوانز نشت BBB وابسته به دوز را پس از چالش با سم دلتا، با لیپوپلی‌ساکارید (LPS) 29 به‌عنوان کنترل مثبت نشان داد (شکل 2m-o). توکسین دلتا با دوز بالا (100 میکروگرم، 8 ساعت) باعث اختلال شدیدتری در BBB نسبت به سم دلتا با دوز پایین طولانی مدت (20 میکروگرم، تجزیه و تحلیل در روز 7) یا LPS حاد (1 میلی گرم، 8 ساعت) شد، که نشان می دهد که سم دلتا به سرعت یکپارچگی BBB را مختل می کند.

ایمونوفلورسانس ZO-1 در هیپوکامپ آسیب ساختاری را با عدم سازماندهی موضعی و کاهش شدت سیگنال تایید کرد (شکل 2p,q).

اختلال BBB اغلب با التهاب عصبی 30، 31 همراه است و سلول‌های CD4 + T روده از طریق BBB به مغز مهاجرت می‌کنند، جایی که با میکروگلیا تجمع می‌یابند و باعث التهاب عصبی می‌شوند. ما در مرحله بعدی جمعیت سلول های ایمنی مغز را پس از قرار گرفتن در معرض سم دلتا مشخص کردیم. در هر دو گروه سنی، سم دلتا با دوز بالا باعث افزایش کل سلول های CD45 + شد (داده های توسعه یافته شکل 5a). این افزایش تا حد زیادی به گسترش قابل توجه جمعیت میکروگلیال نسبت داده می شود که عمدتا منعکس کننده گسترش میکروگلیال است (توسعه داده ها شکل.

5b,c)، با افزایش IBA1 + ایمونوهیستوشیمی تایید شده است (داده های توسعه یافته شکل 5d-g). تجزیه و تحلیل سه بعدی تغییر میکروگلیا را از مورفولوژی منشعب به آمیبوئید نشان داد که با طول شاخه های کوتاه تر و فرآیندهای ضعیف مشخص می شود (داده های توسعه یافته شکل 5d-g). آستروسیت‌های GFAP+ نیز با افزایش انشعاب و حجم سلولی افزایش یافت (داده‌های توسعه‌یافته شکل 5h-k)، که نشان‌دهنده فعال‌سازی پیش التهابی است. سلول های CD4 + و CD8 + T در این نقطه زمانی در سطوح مشابه باقی ماندند (داده های توسعه یافته شکل 5l).

در نوزادان پس از چالش طولانی مدت با دوز کم، گسترش و فعال شدن میکروگلیال (داده های توسعه یافته شکل 5m-r) با افزایش سلول های CD4 + و CD8 + T همراه بود (توسعه داده ها شکل 5s,t)، مطابق با جذب سلول های T 4 روز پس از القای NEC 32 .